La chromatographie sur couche mince (CCM) est une des principales méthodes chromatographiques utilisées dans les laboratoires. Elle permet la séparation d'un grand nombre de composés que l'on veut séparer. Il est important d'expliquer ici la nature des phénomènes impliqués.
Lors de la migration des composés, un rôle décisif est joué par les interactions de type liaison hydrogène. Ces interactions peuvent être de type donneur d'hydrogène (D) ou accepteur d'hydrogène (A). La facilité avec laquelle un composé est entraîné dans la phase mobile dépend de ces interactions, ainsi que de la polarité des composés par rapport à la polarité du support et de l'éluant.
Le support est la phase stationnaire sur laquelle les composés migrent. Il en existe trois principaux : silice, alumine et cellulose. La silice est le support le plus courant. L'alumine, à caractère basique, est conseillée pour séparer des composés polaires, comme les sucres ou les acides aminés.
Le choix de l'éluant est essentiel. On a vu que le choix dépendait de la polarité. L'éluant peut être constitué de solvants purs ou de mélanges de solvants en proportions variées comme 100-0, 75-25, 50-50, 25-75, etc.
Le support à choisir est la silice. Il est conseillé de toujours commencer par celui-là.
Lire aussi: Test et Avis : Pistolet à Eau Électrique M416
Le matériel nécessaire inclut une cuve de développement (souvent un bécher fermé par un couvercle) et l'éluant. La cuve doit être saturée en vapeurs de solvant.
Tracer au crayon un trait à 1 cm du bas de la plaque. C'est là où seront déposés les taches. Les taches doivent être les plus petites et les plus concentrées possibles. Elles peuvent être fabriquées in situ avec un tube en verre.
Introduire la plaque dans la cuve, en veillant à ce que l'éluant ne recouvre pas les dépôts. Laisser l'éluant diffuser. La hauteur maximale atteinte par l'éluant dépend du support et de l'éluant.
La plupart des composés sont incolores et doivent être révélés. Plusieurs méthodes existent :
Les dérivés aromatiques absorbent dans l'UV. Placer la plaque sous une lampe UV et entourer les taches colorées au crayon.
Lire aussi: Comprendre les balles de pistolet
L'iode révèle les composés organiques par formation de taches jaune-marron. Placer la plaque et quelques cristaux d'iode dans une cuve, puis boucher.
Il existe de nombreux réactifs, comme la ninhydrine en solution (révélant les amines en taches noires) ou le réactif de molybdène en présence de sulfate de cérium. Il est important d'éviter toute formation de gouttelettes. Le réactif est appliqué en plusieurs pulvérisations.
Le rapport frontal (Rf), habilement traduit comme Rapport frontal, est le rapport de la distance parcourue par le composé sur la distance parcourue par le front de l'éluant. Il est caractéristique d'un composé donné dans des conditions de support et d'éluant donnés.
Dans un angle de la plaque, on réalise la tache. On laisse éluer dans un premier éluant. Puis, après séchage, on fait tourner la plaque de 90° et on élue dans un deuxième éluant. On obtient alors une cartographie de la protéine.
Lire aussi: Pistolets de traitement du bois
tags: #gif #pistolet #à #eau #fonctionnement
Chargement des visites
