La spectrométrie de masse est une technique d’analyse qui permet la détermination des masses moléculaires des composés analysés ainsi que leur identification et leur quantification. Elle est fondée sur la séparation en phase gazeuse de molécules chargées et la détection d’ions provenant de la molécule à analyser et formés dans une source d’ionisation.
Le spectromètre de masse est un instrument qui comprend différentes parties placées en série. Après l'introduction de l’échantillon, ces parties permettent successivement l’ionisation des analytes contenus dans l’échantillon (source), l’accélération des ions formés, la séparation de ces ions en fonction de leur rapport masse sur charge (m/z) par l’utilisation d’un champ magnétique (analyseur) et enfin leur détection.
Schéma de la structure d’un spectromètre de masse : exemple d'un spectromètre de masse à secteur magnétique associé à une source d'ionisation d'impact électronique.
Lors des études de quantification, la qualité de l’étalonnage est primordiale. L’utilisation d’un étalon interne doit être vivement recommandée. Il est bien connu que l’étalon interne pallie le manque de reproductibilité de la méthode d’analyse d’un échantillon à l’autre.
L'étalonnage interne est une méthode de quantification d'analytes présents dans un échantillon en utilisant un étalon interne. Après avoir ajouté l'étalon interne à l'échantillon, le mélange est injecté dans le système chromatographique. La droite d'étalonnage ainsi obtenue permet de corriger les variations instrumentales et d'améliorer la précision de la quantification.
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Lors de l'analyse d'échantillons inconnus, le rapport des aires des pics est utilisé pour déterminer la concentration de l'analyte en se référant à la droite d'étalonnage. Elle devra donc être privilégié dès que des erreurs liées à l'appareillage sontimportante telle que l'injection manuelle en CPG . On réalise un premier chromatogramme où toutes les concentrations sont connues (standard et étalon interne). me/mi = Ke/Ki . Ke/i.
Pour le dosage, on ajoute le même volume d'étalon au mélange à analyser. Le calcul peut être effectué avec les fraction massique, plus pratiques à utiliser que les masses.
Le préparateur Kiel IV carbonate device est un appareil automatisé permettant l’attaque acide d’échantillons carbonatés à température contrôlée et la purification de molécules de CO2 produit. Le CO2 purifié est ensuite analysé par un spectromètre de masse en mode dual inlet de type Delta V.
Objectifs : Analyse de matériaux carbonatés tel que la Calcite, Aragonite, Dolomie et Apatite biogène en routine dont les interprétations serviront à des fins de reconstitutions paléoenvironnementales ou paléoclimatiques.
Pré-traitements : Broyage si nécessaire, …
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Les échantillons bulk doivent être fournis broyés d’une granulométrie inférieure à 50 µm. Pour un échantillon bulk pur en carbonate la prise d’essai pour une analyse est comprise entre 20 et 120 µg. Pour des échantillons carbonatés d’origine biogénique (par exemple des foraminifères planctoniques) 3 à 4 spécimens suffisent.
Résultats obtenus : Les résultats sont exprimés en ‰ calibrés par rapport au VPDB (Vienna Pee Dee Belemnite). Un standard interne ainsi que des standards internationaux type NBS 19 et NBS 18 sont utilisés en routine au laboratoire pour une calibration par rapport à l’échelle VPDB.
Grâce aux sources d’ionisation disponibles, l’AxION TOF vous permet de choisir celle qui répondra le mieux à vos besoins analytiques lors d’un couplage en Chromatographie Liquide conventionnelle ou en UHPLC. Le principe est très simple. Un liquide (vecteur de charges) est introduit dans la source d’ionisation et est ionisé à l’aide d’une aiguille Corona.
GC-MS est une technique analytique puissante qui permet d’identifier et de quantifier divers composés dans des échantillons complexes. Cependant, pour assurer l’exactitude et la fiabilité de vos résultats, vous devez calibrer votre instrument GC-MS régulièrement et correctement. L’étalonnage est le processus d’établissement de la relation entre la réponse de l’instrument et la concentration d’un étalon connu.
En ce qui concerne la fréquence à laquelle vous devez calibrer votre instrument GC-MS, il n’y a pas de règle universelle; Cependant, certaines directives générales sont d’étalonner avant chaque lot d’échantillons ou au moins une fois par jour. Ceci est particulièrement important si vous changez la colonne, l’injecteur, le détecteur ou le gaz vecteur; analyser les composés volatils, réactifs ou thermiquement instables; travailler avec des matrices complexes ou sales; ou ont besoin d’une grande exactitude et précision pour vos résultats.
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La dernière étape pour comparer et comparer vos performances d’étalonnage GC-MS avec d’autres laboratoires ou étalons consiste à valider votre étalonnage. La validation est le processus de confirmation que votre étalonnage est adapté à l’usage auquel il est destiné et répond aux critères de qualité. Pour valider votre étalonnage, vous devez effectuer des tests de sensibilité, de linéarité, d’exactitude et de précision.
Tests d’aptitude (PT) ou comparaison interlaboratoires (ILC) peuvent également être utilisés pour comparer et comparer votre performance d’étalonnage GC-MS avec d’autres laboratoires ou normes. Ces programmes consistent à envoyer un échantillon à l’aveugle à plusieurs laboratoires et à comparer leurs résultats avec une valeur de référence ou une valeur consensuelle.
Calibration validation ensures GC-MS reliability and precision, critical in high-accuracy fields like pharmaceuticals and food safety. A crucial addition is measuring uncertainty, which enhances confidence in results and supports compliance with ISO/IEC 17025 standards.
Spectroscopie d'émission optique à plasma à couplage inductif (ICP-OES)) Il s'agit d'une technique d'analyse largement utilisée pour détecter et quantifier les éléments traces dans divers types d'échantillons. La précision des résultats ICP-OES dépend fortement de méthodes d'étalonnage efficaces.
L'étalonnage dans l'ICP-OES relie l'intensité du signal mesuré par l'instrument à la concentration réelle d'éléments dans un échantillon. L'étalonnage externe standard est la méthode la plus couramment utilisée dans les systèmes ICP-OES. Cette méthode utilise un étalon interne, c'est-à-dire une quantité connue d'un élément non présent dans l'échantillon ou les étalons. Cette méthode est particulièrement utile pour les échantillons à matrices complexes. Cette approche consiste à adapter la composition matricielle des étalons d'étalonnage à celle des échantillons. Les CRM sont des matériaux très précis et traçables dont les concentrations d'analytes sont connues. Les effets de matrice se produisent lorsque d'autres substances présentes dans l'échantillon influencent le signal d'émission de l'analyte cible.
Les étapes suivantes décrivent les meilleures pratiques pour l'étalonnage dans l'analyse ICP-OES.
| Étape | Description | Conseils clés |
|---|---|---|
| 1. Définir les objectifs d’étalonnage | Déterminez l’exactitude, la précision et les limites de détection requises pour votre analyse. | Comprendre clairement la matrice de l’échantillon et les éléments à analyser. |
| 2. Sélectionnez les normes d'étalonnage | Choisissez des normes avec des concentrations appropriées et une pureté élevée pour les analytes cibles. | Utiliser des matériaux de référence certifiés (MRC) pour plus de fiabilité. |
| 3. Préparer les normes d'étalonnage | Diluez et préparez les étalons dans une matrice similaire à l’échantillon pour minimiser les interférences. | Utilisez de l’eau déionisée et de la verrerie propre pour éviter toute contamination. |
| 4. Optimiser les paramètres de l'instrument | Ajustez les paramètres tels que la puissance RF, le débit du nébuliseur et la hauteur de visualisation pour garantir des performances stables. | Effectuez une routine de préchauffage de l’instrument avant l’étalonnage. |
| 5. Effectuer une mesure à blanc | Mesurez le blanc pour tenir compte du bruit de base et de la contamination. | Assurez-vous que les blancs sont exempts de contamination par des analytes. |
| 6. Exécuter les normes d'étalonnage | Mesurez les normes à plusieurs concentrations pour générer une courbe d'étalonnage. | Utilisez au moins 3 à 5 points, y compris un point de concentration zéro. |
| 7. Vérifier la courbe d'étalonnage | Évaluer la linéarité et le coefficient de corrélation (R² ≥ 0.999 est idéal). | Préparer à nouveau les normes si une non-linéarité est observée. |
| 8. Utiliser des échantillons de contrôle qualité | Analyser des échantillons de CQ indépendants pour valider la précision de l'étalonnage. | Incorporer des échantillons de contrôle qualité adaptés à la matrice pour vérifier les interférences. |
| 9. Surveiller la dérive et la stabilité | Vérifiez l'étalonnage à intervalles réguliers pendant l'analyse pour garantir des performances constantes. | Recalibrer si une dérive ou un écart important est détecté. |
L'utilisation de techniques d'étalonnage efficaces pour l'ICP-OES, telles que les étalons externes, les étalons internes, les ajouts d'étalons, l'étalonnage multipoint, etc., ainsi que la vérification et le réétalonnage réguliers, garantissent des résultats d'analyse précis.
La spectrométrie de masse à haute résolution avec l’Orbitrap Exploris 240 est une technique analytique de pointe permettant l’identification précise, la quantification et l’analyse isotopique des composés organiques complexes. L'analyseur de masse Orbitrap offre une détection haute résolution et haute précision de masse (HRAM), fournissant des empreintes moléculaires détaillées des analytes cibles.
Les échantillons sont ionisés via l'ionisation par électrospray (ESI) ou l'ionisation chimique à pression atmosphérique (APCI), générant des espèces chargées qui entrent ensuite dans l'analyseur de masse. La technologie Orbitrap garantit une précision de masse ultra-élevée et des limites de détection extrêmement basses, ce qui la rend idéale pour l'analyse des contaminants traces, des polluants environnementaux et des biomolécules.
Au-delà de la spectrométrie de masse conventionnelle, l’Orbitrap Exploris 240 est également utilisé pour l’analyse isotopique des isotopes stables (CSIA) ainsi que pour l’analyse isotopique stable intramoléculaire et spécifique à une position moléculaire (PSIA). Cette approche permet un suivi détaillé des sources et des voies de transformation des micropolluants dans les systèmes environnementaux. Le laboratoire est équipé d’un Thermo Scientific Orbitrap Exploris 240, un spectromètre de masse à haute résolution conçu pour l’analyse ciblée et non ciblée des composés organiques, y compris la mesure des rapports isotopiques stables.
La quantification des anticorps monoclonaux (mAbs) dans le plasma est un pré-requis essentiel pour les études PK/PD. Les méthodes de références pour quantifier actuellement les mAbs sont de type ELISA mais les difficultés rencontrées notamment lorsque l’analyse porte sur des mAbs dont la cible pharmacologique est circulante, suggèrent que la spectrométrie de masse serait une alternative intéressante.
Appliquée au bevacizumab, la stratégie développée fait appel à la spectrométrie de masse en tandem utilisée en mode MRM (HPLC-ESI-QqQ) et porte sur l’analyse des peptides spécifiques du bevacizumab obtenus à l’issu d’une protéolyse trypsique. La quantification absolue est réalisée à l’aide d’une droite de calibration obtenue à partir du ratio des aires des peptides du bevacizumab et de l’étalon interne.
Afin de proposer une méthodologie de quantification de référence, nous avons définie les points clés du développement pour la transposition à d’autre mAbs et comparé les deux stratégies d’étalonnage interne les plus employées : l’une utilisant une protéine analogue et l’autre un peptide marqué par des isotopes stables (SIL-peptide). A travers ce développement la stratégie proposée présente un caractère universel vis-à-vis des anticorps monoclonaux de type IgG dont le traitement des échantillons repose sur une purification par protéine A suivit d’une concentration par ultrafiltration et dont la quantification fait appel à l’approche d’étalonnage interne SIL-peptide.
MassLor est une Infrastructure de Recherche en Spectrométrie de Masse de l’Université de Lorraine et du Pôle Scientifique CPM. Resp. F. AUBRIET (Pr)V. CARRÉ (Pr)P. CHAIMBAULT (Pr)J. HERTZOG (IGR)S.
Le projet MobiMultiMS a pour objectif de renforcer les capacités en spectrométrie de masse de l’Infrastructure de Recherche Infra+ MassLor du LCP-A2MC par l’acquisition d’un dispositif de mobilité ionique (IM) couplé à la spectrométrie de masse. L’IM est une technique qui permet de séparer les ions soumis à un champ électrique, en phase gazeuse. Les ions se déplacent et sont séparés selon leur charge, leur masse et leur forme.
Couplée à la spectrométrie de masse, l’IM permet donc de séparer des isomères de masse similaire (m/z). Avec cette technologie il est ainsi possible d’aller plus loin dans l’analyse moléculaire des matrices complexes en ayant accès à l’information isomérique (CCS) et isobarique (m/z).
tags: #calibration #interne #spectrometrie #de #masse
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