En chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC), la méthode d'étalonnage la plus couramment utilisée est généralement l'étalonnage externe (ou étalonnage par étalon externe). L'étalonnage externe est relativement simple à mettre en œuvre.
Cependant, il est important de noter que l'étalonnage interne (utilisant un étalon interne) peut également être utilisé, en particulier dans des situations où il est essentiel de corriger les variations potentielles pendant l'analyse.
Dans un étalonnage interne, on va rajouter un composé (appelé étalon interne) dans toutes les solutions étalons. Les solutions étalons contiennent donc les composés à doser, à des concentrations croissantes, ainsi qu’un étalon interne rajouté à la même concentration dans tous les points de gamme.
L’étalonnage est donc plus compliqué à mettre en œuvre que l’étalonnage externe - en pratique, on met en œuvre un étalonnage interne lorsque la méthode d’analyse manque de répétabilité ou de reproductibilité.
L’« étalon interne » est une espèce chimique inerte qui est introduite en concentration connue cE dans le mélange à analyser. Il est donc essentiel qu’un étalon interne soit inerte, qu’il soit bien séparé des autres analytes du mélange sur le chromatogramme (pas de superposition entre son pic et celui d’un des analytes), mais avec un temps de rétention assez proche de ces analytes.
Lire aussi: Le pistolet tracer courbe expliqué
Si toutes les analyses CPG sont effectuées dans les mêmes conditions, les valeurs de ki et kE sont les mêmes dans toutes les analyses. Il suffit donc d’étudier les rapports $\frac{A_{i}}{A_{E}}$ et non simplement les aires Ai des pics des analytes.
On remarque bien que les aires obtenues pour l’étalon interne sont effectivement sensiblement différentes, parce que le volume injecté n’est pas rigoureusement identique d’une analyse à l’autre. Pour déterminer Ci à partir de Ai, il est donc nécessaire de connaître le volume injecté avec précision, ce qui n’est pas toujours possible.
Il est ainsi possible de doser par exemple l’éthanol d’alcools forts commerciaux, en utilisant le 4-méthylpentan-2-ol comme étalon interne [7].
Nous avons suivi le protocole proposé par l’ouvrage « Quarante expériences illustrées de chimie générale et organique : La chimie, une science expérimentale », de Elodie Martinand-Lurin et Raymond Grüber [8] qui utilise l’acide para-toluènesulfonique (APTS) comme catalyseur. En pratique, on introduit, dans un ballon monocol de 50 mL, 3,0 mL d'acide éthanoïque glacial, 5,0 mL d'alcool benzylique et 5 mL de toluène.
Un échantillon de brut réactionnel est prélevé aux dates t = 10 min, t = 20 min et t = 30 min (la date t = 0 correspondant au début du reflux). Cet échantillon est dilué 500 fois dans l’éther diéthylique, puis injecté dans le chromatographe, sur colonne apolaire ; l’analyse est conduite avec un gradient de température 50 - 250 °C sur 10 min.
Lire aussi: Comprendre la Courbe de Calibration
Une première interprétation qualitative permet de voir l’avancement de la réaction. Les calibrations permettent de retrouver les concentrations en alcool benzylique et en acétate de benzyle dans le milieu réactionnel aux différents temps de réaction.
Cela suppose que les volumes injectés soient à peu près constants ; au vu de la précision nécessaire ici, une injection soignée suffit à s’en assurer, mais l’utilisation d’un étalon interne permettrait plus de précision.
On obtient une droite de relation générale A = a τe + b. Le rapport b/a est égal à la concentration en élément à doser ce qui revient à regarder graphiquement la valeur de la concentration massique lorsque l'aire A est égale à 0. L'inconvénient de la méthode des ajouts dosés réside dans le fait qu'il faut disposer du produit pur pour effectuer l'ajout.
On peut également utiliser la méthode sans courbe d'étalonnage mais cette méthode ne donne aucune information sur justesse de la mesure. d’où : x2 =x’2.A2/A’2 .
En résumé, l'étalon interne est utilisé pour corriger les variations pendant l'analyse, tandis que l'étalon externe établit une relation entre la concentration et la réponse du détecteur pour quantifier les composants de l'échantillon.
Lire aussi: Chromatographie : Courbe de Calibration
tags: #courbe #de #calibration #HPLC #principe
Chargement des visites
